导  语

1. CAFs中CCT6A的表达与胃癌的化疗耐药、糖代谢及不良预后相关

研究人员通过分析TCGA胃癌数据集和FUSCC队列的RT-qPCR结果、进行免疫印迹分析，发现胃癌组织中CCT6A表达显著高于正常胃组织；通过ELISA实验发现胃癌患者血清中CCT6A水平显著高于健康对照组，且晚期患者血清CCT6A水平更高；通过双重免疫组织化学和多重免疫荧光染色，确定CCT6A在癌上皮和基质中均有定位，且CAFs中CCT6A阳性细胞频率显著高于正常成纤维细胞，与CAF丰度正相关；对比化疗耐药和非耐药患者，发现耐药组中CCT6A阳性CAFs富集程度和血清CCT6A水平更高；结合PET/CT成像，发现CCT6A高表达与肿瘤糖酵解活性增强相关；通过生存分析，发现CCT6A阳性CAFs丰度高的患者预后更差，是独立预后因素。

图1 癌相关成纤维细胞中CCT6A的表达与胃癌患者化疗耐药性、葡萄糖代谢及不良预后呈显著相关性

2. CCT6A通过磷酸化调控促进β-连环蛋白的核转位

研究人员通过共培养体系，将CAFs与胃癌细胞系（HGC-27、MKN-45）共培养，并设置敲低或过表达CCT6A的实验组，观察胃癌细胞干性、化疗耐药及糖代谢相关表型变化，发现CAFs可增强胃癌细胞干性和化疗耐药性，敲低CAFs中的CCT6A可显著削弱这些作用，而过表达则增强该作用。为明确CAFs对胃癌细胞的影响是否通过外泌体，研究人员通过差速超速离心法从CAFs培养上清中分离外泌体，用PKH67标记后与胃癌细胞共孵育，发现外泌体可被胃癌细胞摄取；使用外泌体分泌抑制剂GW4869处理CAFs后，其对胃癌细胞干性和化疗耐药的促进作用减弱，证实CAFs通过外泌体影响胃癌细胞。对共培养体系中的胃癌细胞进行RNA测序及生物信息学分析，发现差异表达基因与糖代谢、Wnt信号通路等相关，结合功能富集分析，揭示CAF外泌体CCT6A调控的关键通路。综合上述方法研究人员得出CAFs通过外泌体将CCT6A转运至胃癌细胞，增强胃癌细胞干细胞特性、化疗耐药性及糖代谢活性，且外泌体CCT6A主要通过调控Wnt信号通路等发挥作用。

3. CCT6A/β-连环蛋白相互作用增强c-Myc活性抑制DDIT4和TXNIP的转录

研究人员通过对CCT6A敲低的胃癌细胞进行通路分析，发现 Myc靶基因显著富集；利用染色质免疫沉淀(ChIP)和荧光素酶报告基因实验，证实CCT6A过表达可增强β-连环蛋白与c-Myc启动子的结合；通过ChIP-seq、RNA-seq等实验，筛选出c-Myc的保守靶基因DDIT4和TXNIP，并确认c-Myc 可直接结合DDIT4和TXNIP的启动子并抑制其表达，且CCT6A过表达会增强这种抑制作用，而β-连环蛋白抑制剂XAV939可影响该过程，最终发现CCT6A与β-连环蛋白相互作用通过增强c-Myc活性，转录抑制DDIT4和TXNIP以驱动胃癌进展。

5.CCT6A和CCT6P1是c-Myc的直接转录靶标

7.CAF来源的外泌体CCT6A通过激活β-连环蛋白/DDIT4-TXNIP轴增强胃癌细胞的干性、化疗耐药性和糖酵解

研究人员用来自CCT6A过表达或敲低的CAFs的外泌体处理胃癌细胞(HGC-27、MKN-45)，通过球体形成实验检测细胞干性，发现CCT6A过表达的CAF外泌体可增强胃癌细胞的自我更新能力，而敲低CCT6A的CAF外泌体则抑制该能力；采用流式细胞术检测顺铂处理后的细胞凋亡情况，显示CCT6A过表达的CAF外泌体可降低胃癌细胞凋亡率，敲低CCT6A的CAF外泌体则增加凋亡率；通过代谢谱分析(检测糖酵解关键酶表达、葡萄糖摄取、乳酸和ATP生成，以及糖酵解质子外排率、氧消耗率)，发现CCT6A过表达的CAF外泌体可促进胃癌细胞的糖酵解和氧化磷酸化；使用Wnt/β-连环蛋白信号抑制剂XAV939处理细胞，结合上述功能实验，证实该信号通路参与调控；通过在胃癌细胞中过表达DDIT4和TXNIP，观察其对CCT6A过表达CAF外泌体诱导的肿瘤表型的影响，发现可部分逆转相关效应，所以CAF来源的外泌体CCT6A通过激活β-连环蛋白/DDIT4-TXNIP轴，增强胃癌细胞的干性、化疗耐药性和糖酵解。