三级淋巴结构(TLS)作为肿瘤免疫前沿研究热点，在评估免疫治疗疗效和预测患者预后方面展现出巨大潜力。随着多重荧光免疫组化(mIHC)技术的成熟，研究者如今能够精准解析TLS的异质性及其在肿瘤免疫微环境中的空间分布。
本文将结合最新专家共识与前沿研究，深入探讨mIHC在TLS研究中的应用价值与技术实现路径。
1、TLS：肿瘤免疫治疗的“前沿哨站”
三级淋巴结构是在慢性炎症或肿瘤组织等非淋巴组织中异位形成的淋巴聚集体，在肿瘤免疫中扮演着关键角色。它们通常包含B细胞滤泡，并被T细胞和树突状细胞包围。
TLS的重要性源于其与免疫治疗疗效和患者预后的密切关联。研究表明，TLS的存在与患者对免疫治疗的反应性增强和更好的肿瘤预后显著相关。在透明细胞肾细胞癌(ccRCC)中，近34.2%的患者样本中可检测到TLS。
（图：透明细胞肾细胞癌（ccRCC）中TLS定位异质性特征）
2、mIHC：解析TLS异质性的“利器”
多重荧光免疫组化(mIHC)基于酪氨信号放大原理，可在单张FFPE组织切片上进行多种标志物染色，识别不同细胞亚群，并采用专业的人工智能数字病理图像分析软件进行全片定量分析。
与传统免疫组化技术相比，mIHC具有多重标记、原位分析和高通量定量的优势，能够同时评估肿瘤微环境中多个免疫相关标志物的表达，考察肿瘤微环境浸润类型和TLS的分布状态。
mIHC技术在染色环节解决了抗体来源冲突的问题，可实现常规7-9种标志物的染色；在扫描成像环节解决了串色干扰问题，提高了图片信噪比；在图像分析环节解决了定量分析标准化的问题。
3、TLS评估的关键维度与共识建议
Ⅰ. TLS定位异质性——位置决定功能
复旦大学附属肿瘤医院团队针对ccRCC的研究发现，TLS的位置与其功能密切相关。在TLS阳性病例中，有37.8%的TLS位于肿瘤近端，74.1%位于肿瘤远端，11.9%同时存在于两个区域。
重要的是，肿瘤近端TLS的存在与长期生存率的改善相关，而肿瘤远端TLS则与长期生存率低和疾病进展显著相关。这种定位异质性与不同的临床结局密切相关，凸显了空间信息在TLS评估中的重要性。Ⅱ. TLS成熟度分型——阶段影响预后根据专家共识，TLS根据成熟度可分为三个阶段：早期TLS(E-TLS)、原发性滤泡样TLS(PFL-TLS)(又名初级TLS)、继发性滤泡样TLS(SFL-TLS)(又名次级TLS)。继发性滤泡样TLS又被称为成熟的TLS。成熟的TLS含有CD3+ T细胞、CD20+ 滤泡B细胞、CD21+ 滤泡树突状细胞和CD23+ 生发中心细胞。研究表明，SFL-TLS的存在与更好的临床结局显著相关，而肿瘤远端TLS簇中E-TLS的比例显著较高。
（图：透明细胞肾细胞癌中TLS成熟异质性的特征）
Ⅲ. 标准化评估流程——从定性到定量
专家共识推荐的TLS评估流程包括：
1）TLS定位评估：通过H&E切片初步识别TLS定位；2）TLS成熟度评估：通过mIHC技术评估肿瘤微环境中TLS的成熟度;3）细胞组成分析：通过mIHC量化免疫细胞浸润及分布情况;4）空间关系解析：分析免疫细胞与肿瘤细胞的空间位置关系；4、专家共识下的标准化路径与挑战
尽管mIHC在TLS研究中展现出强大潜力，但专家共识指出，目前尚无TLS定量分析的标准方法，包括绝对TLS计数、TLS组成细胞分析、结构特征、TLS空间位置、密度和成熟度评估等。
高质量的专家共识建议，TLS评估应建立标准化流程，确保评估过程的透明性和规范性，并明确定量评估的标准。这对于推动mIHC技术在TLS研究中的广泛应用至关重要。
5、前景与展望：mIHC引领TLS临床转化
尽随着多项临床研究的推进，TLS的评估标准正逐步统一。专家共识重点关注TLS的结构完整性、细胞组成和空间定位等维度。
mIHC技术凭借其高通量多靶点、原位信息保留的特点，完美契合TLS评估需求，正逐步成为临床研究与伴随诊断开发的优选工具。
6、艾克发生物mIHC解决方案
艾克发生物依托全流程mIHC技术平台，提供从标志物组合设计、组织切片染色到多重图像分析的完整服务，为您解锁TLS在肿瘤免疫治疗中的巨大潜力，同时我们在尝试建立TLS评估的标准化流程以及标准定量评估的方法学研究，为TLS临床应用的发展贡献一份力量。
如果您正在开展肿瘤免疫相关研究，或希望深入探索TLS的临床价值，欢迎联系艾克发生物技术团队，获取专业方案设计及典型数据！
艾克发生物三级淋巴结构专属优惠活动正在进行中：三级淋巴结构相关成熟Panel(AE08/09/10/20/21系列)可享服务样本数买一送一(样本总数不低于20张，包含染色+成像+数据分析)。
活动截止日期：2025年12月30日；
更多信息欢迎咨询：info@alphaxbio.com；
活动最终解释权归艾克发生物所有。
相关链接
艾克发生物，公众号：艾克发生物艾上福利 |多重免疫组化(mIHC)助力三级淋巴结构研究！
7、参考文献
[1]Yang M, Che Y, Li K Z, et al. Detection and quantitative analysis of tumor-associated tertiary lymphoid structures[J]. J Zhejiang Univ Sci B. 2023, 24(9):779-795.
[2]Xu W, Lu J, Liu W R, et al. Heterogeneity in tertiary lymphoid structures predicts distinct prognosis and immune microenvironment characterizations of clear cell renal cell carcinoma[J]. Journal for Immunotherapy of Cancer, 2023, 11(12): e006667.[3]中国抗癌协会肿瘤病理专业委员会肺癌协作组, 中国临床肿瘤学会非小细胞肺癌专业委员会. 非小细胞肺癌三级淋巴结构评估及临床应用中国专家共识（2025版）. 中国肺癌杂志, 2025, 28(2): 95-104.
三级淋巴结构(TLS)作为肿瘤免疫前沿研究热点，在评估免疫治疗疗效和预测患者预后方面展现出巨大潜力。随着多重荧光免疫组化(mIHC)技术的成熟，研究者如今能够精准解析TLS的异质性及其在肿瘤免疫微环境中的空间分布。
本文将结合最新专家共识与前沿研究，深入探讨mIHC在TLS研究中的应用价值与技术实现路径。
1、TLS：肿瘤免疫治疗的“前沿哨站”
三级淋巴结构是在慢性炎症或肿瘤组织等非淋巴组织中异位形成的淋巴聚集体，在肿瘤免疫中扮演着关键角色。它们通常包含B细胞滤泡，并被T细胞和树突状细胞包围。
TLS的重要性源于其与免疫治疗疗效和患者预后的密切关联。研究表明，TLS的存在与患者对免疫治疗的反应性增强和更好的肿瘤预后显著相关。在透明细胞肾细胞癌(ccRCC)中，近34.2%的患者样本中可检测到TLS。
（图：透明细胞肾细胞癌（ccRCC）中TLS定位异质性特征）
2、mIHC：解析TLS异质性的“利器”
多重荧光免疫组化(mIHC)基于酪氨信号放大原理，可在单张FFPE组织切片上进行多种标志物染色，识别不同细胞亚群，并采用专业的人工智能数字病理图像分析软件进行全片定量分析。
与传统免疫组化技术相比，mIHC具有多重标记、原位分析和高通量定量的优势，能够同时评估肿瘤微环境中多个免疫相关标志物的表达，考察肿瘤微环境浸润类型和TLS的分布状态。
3、TLS评估的关键维度与共识建议
Ⅰ. TLS定位异质性——位置决定功能
复旦大学附属肿瘤医院团队针对ccRCC的研究发现，TLS的位置与其功能密切相关。在TLS阳性病例中，有37.8%的TLS位于肿瘤近端，74.1%位于肿瘤远端，11.9%同时存在于两个区域。
重要的是，肿瘤近端TLS的存在与长期生存率的改善相关，而肿瘤远端TLS则与长期生存率低和疾病进展显著相关。这种定位异质性与不同的临床结局密切相关，凸显了空间信息在TLS评估中的重要性。Ⅱ. TLS成熟度分型——阶段影响预后根据专家共识，TLS根据成熟度可分为三个阶段：早期TLS(E-TLS)、原发性滤泡样TLS(PFL-TLS)(又名初级TLS)、继发性滤泡样TLS(SFL-TLS)(又名次级TLS)。继发性滤泡样TLS又被称为成熟的TLS。成熟的TLS含有CD3+ T细胞、CD20+ 滤泡B细胞、CD21+ 滤泡树突状细胞和CD23+ 生发中心细胞。研究表明，SFL-TLS的存在与更好的临床结局显著相关，而肿瘤远端TLS簇中E-TLS的比例显著较高。
（图：透明细胞肾细胞癌中TLS成熟异质性的特征）
Ⅲ. 标准化评估流程——从定性到定量
专家共识推荐的TLS评估流程包括：
1）TLS定位评估：通过H&E切片初步识别TLS定位；2）TLS成熟度评估：通过mIHC技术评估肿瘤微环境中TLS的成熟度;3）细胞组成分析：通过mIHC量化免疫细胞浸润及分布情况;4）空间关系解析：分析免疫细胞与肿瘤细胞的空间位置关系；4、专家共识下的标准化路径与挑战
尽管mIHC在TLS研究中展现出强大潜力，但专家共识指出，目前尚无TLS定量分析的标准方法，包括绝对TLS计数、TLS组成细胞分析、结构特征、TLS空间位置、密度和成熟度评估等。
高质量的专家共识建议，TLS评估应建立标准化流程，确保评估过程的透明性和规范性，并明确定量评估的标准。这对于推动mIHC技术在TLS研究中的广泛应用至关重要。
5、前景与展望：mIHC引领TLS临床转化
尽随着多项临床研究的推进，TLS的评估标准正逐步统一。专家共识重点关注TLS的结构完整性、细胞组成和空间定位等维度。
mIHC技术凭借其高通量多靶点、原位信息保留的特点，完美契合TLS评估需求，正逐步成为临床研究与伴随诊断开发的优选工具。
6、艾克发生物mIHC解决方案
艾克发生物依托全流程mIHC技术平台，提供从标志物组合设计、组织切片染色到多重图像分析的完整服务，为您解锁TLS在肿瘤免疫治疗中的巨大潜力，同时我们在尝试建立TLS评估的标准化流程以及标准定量评估的方法学研究，为TLS临床应用的发展贡献一份力量。
如果您正在开展肿瘤免疫相关研究，或希望深入探索TLS的临床价值，欢迎联系艾克发生物技术团队，获取专业方案设计及典型数据！
艾克发生物三级淋巴结构专属优惠活动正在进行中：三级淋巴结构相关成熟Panel(AE08/09/10/20/21系列)可享服务样本数买一送一(样本总数不低于20张，包含染色+成像+数据分析)。
活动截止日期：2025年12月30日；
更多信息欢迎咨询：info@alphaxbio.com；
活动最终解释权归艾克发生物所有。
相关链接
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7、参考文献
[1]Yang M, Che Y, Li K Z, et al. Detection and quantitative analysis of tumor-associated tertiary lymphoid structures[J]. J Zhejiang Univ Sci B. 2023, 24(9):779-795.
